Тънкослойната хроматография е метод за химичен анализ, основан на използването на сорбентен слой с дебелина 0,1-0,5 mm като стационарна фаза. Методът TLC може да се използва в различни области и позволява определянето на голямо разнообразие от химични съединения.
Метод принцип
Методът на тънкослойната хроматография се ражда от хартиената хроматография и първите експерименти са проведени през 80-те години на 19 век. Активното използване на този анализ започва едва след 1938 г.
TLC техниката включва подвижна фаза (елуент), неподвижна фаза (сорбент) и аналит. Стационарната фаза се прилага и фиксира върху специална плоча. Плочата може да бъде направена от стъкло, алуминий или пластмаса - това са субстрати за многократна употреба, които трябва да бъдат добре измити, изсушени и подготвени за нанасяне на сорбента след всяка употреба. Също така е възможно да се използват хартиени плочи, които се изхвърлят след употреба.
Като неподвижна фаза най-често се използва силикагел, но е възможно да се използват и други сорбенти, например алуминиев оксид. Когато се използва този или онзи сорбент, трябва стриктно да се спазва технологията, за да бъде резултатът точен, например, защото силикагелът може да даде неправилен резултат, ако въздухът в лабораторията е твърде влажен.
Като подвижна фаза се използват разтворители, например вода, оцетна киселина, етанол, ацетон, бензен. Изборът на разтворител трябва да се вземе отговорно, тъй като резултатът от хроматографията директно зависи от неговите качества (вискозитет, плътност, чистота). За всяка анализирана проба се избира индивидуален разтворител.
Анализ
Пробата трябва да се разрежда в разтворител. Ако не се получи пълно разтваряне и останат твърде много примеси, пробата може да се почисти чрез екстракция.
Нанасянето на пробата върху плочата може да се извърши автоматично или ръчно. Автоматичното нанасяне използва метод на микроразпръскване, при който всяка проба се напръсква върху съответната област на основата. За ръчно нанасяне се използва микропипета. На плочата за всяка проба се поставят маркировки с молив. Всяка проба се нанася с капиляр върху плочата в една линия на достатъчно разстояние от маркировките, за да не реагира с въглерод от оловото.
Плочата се поставя в съд, на дъното на който се излива елуентът. Опората се поставя с един ръб в съда до маркираната линия. Съдът е плътно затворен, за да се избегне изпаряването на подвижната фаза. Под действието на капилярни сили елуентът започва да се издига нагоре по сорбентния слой. Когато елуентът достигне определено ниво, плочата се изважда от съда и се изсушава.
Ако желаното вещество няма цвят, то няма да се вижда на основата. Следователно се извършва визуализация - обработка на плочата с йодни пари или други багрила.
След такава обработка се оценява резултатът. На сорбента се появяват цветни области с различна интензивност. За да се определи вещество (или група вещества), цветните области, техният размер, интензивност и подвижност се сравняват с референтна проба.
Методът TLC се използва широко, тъй като е бърз, евтин, точен, интуитивен, не изисква сложно оборудване и е лесен за интерпретация.
